Al sinds jaar en dag verzorgt het Koor van De Nationale Opera de koorpartijen van de operaproducties van De Nationale Opera. Het ensemble bestaat uit professioneel geschoolde musici die ook regelmatig als solist te horen zijn. Spraakmakend was het optreden van het koor in grote producties als Saint François d’Assise van Messiaen, Les Troyens van Berlioz en Guillaume Tell van Rossini. Voor zijn aandeel in Schönbergs Moses und Aaron ontving het koor in 1996 de Prix d’Amis van de Vrienden van De Nationale Opera. Het befaamde vakblad Opernwelt riep het koor uit tot het beste operakoor van 2016.
Regelmatig werkt het Koor van De Nationale Opera mee aan concerten en producties buiten het podium van het muziektheater van Amsterdam. Zo schitterden de zangers in een concertante uitvoering van Wagners Der fliegende Holländer tijdens het Gergiev Festival 2013, een concert dat ook met groot succes in Parijs en Dortmund werd gespeeld. Van september 2014 tot april 2021 stond het koor onder artistieke leiding van Ching-Lien Wu.